The effect of sublethal photodynamic therapy on the expression of Enterococcal surface protein (esp) encoding gene in Enterococcus faecalis: Quantitative real-time PCR assessment
مقدمه: در طول فتودینامیک‌تراپی ضدمیکروبی (aPDT) برای درمان عفونت‌های داخل کانال ریشه، احتمال زیادی وجود دارد که میکروارگانیسم‌ها در معرض دوزهای زیرکشنده PDT (sPDT) قرار گیرند. اگرچه sPDT منجر به مرگ میکروارگانیسم‌ها نمی‌شود، اما می‌تواند تأثیر قابل‌توجهی بر حدت بیماری‌زایی (Virulence) میکروارگانیسم‌ها داشته باشد. هدف از این مطالعه، بررسی اثر sPDT بر بیان ژن پروتئین سطحی انتروکوک (esp) به‌عنوان یکی از عوامل اصلی بیماری‌زایی مؤثر در تشکیل بیوفیلم در Enterococcus faecalis بود.
مواد و روش‌ها: اثرات کشنده و زیرکشنده aPDT با استفاده از ایندوسیانین گرین (ICG)، تولوئیدین بلو O (TBO) و متیلن بلو (MB) به‌عنوان حساس‌کننده‌های نوری (PSs)، همراه با لیزرهای دیود با طول موج‌های ۶۶۰، ۶۳۵ و ۸۱۰ نانومتر بر E. faecalis، با استفاده از آزمون شمارش واحدهای تشکیل‌دهنده کلنی (CFU) بررسی شد.
با در نظر گرفتن دوزهای زیرکشنده حساس‌کننده‌های نوری و مدت زمان تابش لیزر دیود، میزان بیان ژن esp با استفاده از روش PCR کمی در زمان واقعی (qRT-PCR) ارزیابی شد.
نتایج: استفاده از ICG در غلظت ۳۱٫۲ تا ۱۰۰۰ میکروگرم بر میلی‌لیتر و همچنین TBO و MB در غلظت ۶٫۲ تا ۱۰۰ میکروگرم بر میلی‌لیتر، موجب کاهش معنی‌دار رشد E. faecalis شد.
لیزرهای دیود ۶۶۰، ۶۳۵ و ۸۱۰ نانومتر به‌ترتیب با چگالی انرژی ۹۳٫۷۵ تا ۱۴۰٫۶۲، ۱۳۷٫۵ تا ۲۰۶٫۲۵ و ۳۱٫۲۵ تا ۶۲٫۵ ژول بر سانتی‌متر مربع موجب کاهش تعداد باکتری‌ها شدند.
به‌عنوان دوز sPDT علیه E. faecalis، شرایط زیر شناسایی شد:
- ICG: غلظت ۱۵٫۶ میکروگرم بر میلی‌لیتر + زمان تابش ۰٫۵ دقیقه
- TBO: غلظت ۳٫۱ میکروگرم بر میلی‌لیتر + زمان تابش ۳ دقیقه
- MB: غلظت ۳٫۱ میکروگرم بر میلی‌لیتر + زمان تابش ۳ دقیقه
بیان ژن esp در دوزهای زیرکشنده ICG، در مقایسه با TBO و MB، به‌طور معنی‌داری کاهش یافت؛ این کاهش در مقایسه با TBO حدود ۲ برابر و در مقایسه با MB حدود ۲٫۴ برابر بود.
نتیجه‌گیری: اگرچه تمام حساس‌کننده‌های نوری مورد آزمایش موجب کاهش تعداد باکتری‌ها شدند، ICG به دلیل اثربخشی بیشتر در کاهش بیان ژن esp می‌تواند به‌عنوان بهترین حساس‌کننده نوری برای درمان عفونت‌های اندودنتیک در نظر گرفته شود؛ زیرا ژن esp نقش مهمی در تشکیل بیوفیلم E. faecalis دارد.
کلیدواژه‌ها: فتودینامیک‌تراپی ضدمیکروبی؛ Enterococcus faecalis؛ Esp؛ ایندوسیانین گرین؛ متیلن بلو؛ تولوئیدین بلو O.
ارسال نظر